Gram-Farging

Laget av Monica Z. Bruckner

Hva er Gram-Farging?

Gram-farging er en vanlig teknikk som brukes for å skille mellom to store grupper av bakterier som er basert på deres ulike cellevegg bestanddeler. Den gramfarging prosedyre skiller mellom Gram positive og Gram negative grupper av farging disse cellene rød eller fiolett., Gram-positive bakterier flekken fiolett på grunn av tilstedeværelsen av et tykt lag av peptidoglycan i sine cellevegger, som beholder crystal violet disse cellene er farget med. Alternativt, Gram-negativ bakterier flekken rød, som er knyttet til en tynnere peptidoglycan veggen, som ikke beholde crystal violet under decoloring prosessen.

Hvordan Gjør Gram-Farging Arbeid?

Gram-farging innebærer tre prosesser: farging med en vannløselige fargestoff som heter crystal violet, decolorization, og counterstaining, vanligvis med safanin., På grunn av forskjeller i tykkelsen av et peptidoglycan lag i cellemembranen mellom Gram positive og Gram negative bakterier, Gram-positive bakterier (med en tykkere peptidoglycan lag) beholder crystal violet flekken under decolorization prosessen, mens de Gram-negativ bakterier miste krystall fiolett farge og er i stedet farget av safranin i den endelige fargeprosessen. Prosessen omfatter tre trinn:

1. Celler farget med krystall fiolett farge., Neste, et Gram er jod-løsning (jod og kalium jodid) er lagt til for å danne et kompleks mellom crystal violet og jod. Dette komplekset er et større molekyl enn den opprinnelige krystall fiolett farge og jod, og er uløselig i vann.
2. En decolorizer som etylalkohol eller aceton er lagt til utvalget, som tørker den peptidoglycan lag, krymper og stramme den. Den store crystal violet-jod-komplekset er ikke i stand til å trenge denne strammet peptidoglycan lag, og er dermed fanget i cellen i Gram-positive bakterier., Derimot er den ytre membran av Gram negative bakterier er degradert og tynnere peptidoglycan lag av Gram-negative celler er i stand til å beholde crystal violet-jod-kompleks, og fargen er tapt.
3. En counterstain, for eksempel svakt vannløselig safranin, er lagt til prøven, farging den røde. Siden safranin er lettere enn crystal violet, gjør det ikke forstyrre den lilla fargen i Gram-positive celler. Men decolorized Gram-negative celler er farget rødt.,

Hvordan Å – Farging-Protokollen og Bekymringer:

Reagenser:

• Crystal violet (primær flekken)
• Jod-løsning/Gram er Jod (mordant som løser crystal violet å cellevegg)
• Decolorizer (f.eks. etanol)
• Safranin (sekundær flekken)
• Vann (helst på en squirt flaske)

1. Lag en side av cellen eksempel å være farget. Varme fikse prøven til lysbildet ved å nøye passerer skyv med en dråpe eller et lite stykke eksempel på det gjennom en Bunsen-brenner tre ganger.,
2. Legg til den primære flekken (crystal violet) for å prøve/skyv og inkuber i 1 minutt. Skyll skyv med en svak strøm av vann for maksimalt 5 sekunder for å fjerne ubundne crystal violet.
3. Legg til Gram er jod i 1 minutt – dette er en mordant, eller en agent som løser crystal violet å bakteriell cellevegg.
4. Skyll eksempel/lysbilde med aceton eller alkohol for ~3 sekunder og skyll med en svak strøm av vann. Alkohol vil decolorize prøven hvis det er Gram-negativ, fjerne crystal violet., Imidlertid, hvis alkohol er fortsatt på prøve for lenge, det kan også decolorize Gram-positive celler.
5. Legge til den sekundære flekken, safranin, til lysbildet, og inkuber i 1 minutt. Vask med en svak strøm av vann for maksimalt 5 sekunder. Hvis bakteriene er Gram-positive, det vil beholde den primære flekken (crystal violet) og ikke ta den sekundære flekken (safranin), forårsaker den til å se fiolett/lilla under et mikroskop. Hvis bakteriene er Gram-negativ, vil den miste den primære flekken og ta den sekundære flekken, forårsaker den til å vises røde sett under et mikroskop.,

Litteratur

Related Links

Undervisning Aktiviteter