Gel elektroforese brukes til å skille makromolekyler som DNA, RNA og proteiner. DNA-fragmentene er skilt i henhold til deres størrelse. Proteiner kan være atskilt i henhold til sin størrelse og sine kostnader (forskjellige proteiner har ulike kostnader).
Hvordan er DNA-fragmentene separeres ved hjelp av gelelektroforese?
En løsning av DNA-molekyler er plassert i en gel., Fordi hvert DNA-molekyl som er negativt ladet, kan det trekkes gjennom gelen av et elektrisk felt. Små DNA-molekylene beveger seg raskere gjennom gelen enn større DNA-molekyler.
resultatet er en serie av ‘band’, med hvert bånd inneholder DNA-molekyler av en bestemt størrelse. Bandene som er lengst fra starten av gel inneholder den minste fragmenter av DNA. Bandene som er nærmest til starten av gel inneholder den største DNA-fragmenter.,
Når er gel elektroforese brukes til å skille DNA-fragmenter?
Gel elektroforese kan brukes til en rekke formål, for eksempel:
- for Å få en DNA-fingeravtrykk for rettsmedisinske formål
- for Å få en DNA-fingeravtrykk for farskap testing
- for Å få en DNA-fingeravtrykk, slik at du kan se for evolusjonære relasjoner mellom organismer
- for Å sjekke en PCR-reaksjon.,
Se videoklippet: ved Hjelp av gel elektroforese for å sjekke en PCR-reaksjon - for Å teste for gener som er assosiert med en bestemt sykdom.
Finne ut mer i artikkelen, Gel elektroforese kan brukes til å finne gener som er assosiert med sykdom.
Når er gel elektroforese brukes til å skille proteiner?
Takk til TV-serier som CSI, mange mennesker er kjent med bruk av gel elektroforese for å skille makromolekyler som DNA. Imidlertid, gel elektroforese kan også brukes for å skille ut proteinet.,
Forskjellige proteiner har ulike størrelser, hovedsakelig på grunn av antall aminosyre byggesteinene i deres struktur. Kjemiske endringer knyttet til protein også påvirke sin størrelse. Forskjellige proteiner har også ulike belastninger. Dette kan skyldes både typer aminosyre som brukes til å lage dem, så vel som typer endringer som er knyttet til dem.
Forskjellige typer gel elektroforese brukes til å gi ulike typer av informasjon. Den slags gel du velger, avhenger derfor av den typen spørsmål du stiller.,
Størrelse Separasjon
Vanligvis, gele laget av polyakrylamid er brukt for å skille proteiner på grunnlag av deres ulike størrelser. Vanligvis proteiner er først behandlet med varme og en kjemisk kalt HMS-datablad for å løse protein. SDS er et vaskemiddel som gir alle proteiner samme overordnede negativ ladning slik at når en elektrisk strøm brukes til gel, separasjon er bare på grunn av størrelsen på protein. Denne teknikken kalles SDS-PAGE (SDS-Polyakrylamid gel elektroforese).,
Lite protein molekyler beveger seg raskere gjennom gelen enn større proteiner, noe som resulterer i en serie av ‘band’. Hvert bånd inneholder et protein av en bestemt størrelse. Disse kan sammenlignes med standarder for kjente størrelser.
En SDS-PAGE gel har blitt brukt for å skille proteiner på grunnlag av størrelse. Prøvene er blodet av ulike hai arter. Den første lane inneholder markører av kjente størrelser. Store proteiner er på toppen av gel og små proteiner er på bunnen.,
Denne teknikken kan brukes til mange formål, inkludert å rense et bestemt protein, for eksempel å isolere et enzym for næringsmiddelindustrien.
Kostnad og pH separasjon
Isoelectric fokusering (IEF) og agarose gel elektroforese er to måter som proteiner kan være atskilt med sine forskjellige elektriske ladninger. I motsetning til SDS-PAGE, proteiner er vanligvis holdt i sin opprinnelige (foldet) tilstand. Den type gel som er brukt, og løsningen rundt gel, er også forskjellige.
I agarose gel elektroforese, proteiner er lagt i midten av brønnen., De med en sterk negativ ladning flytte raskeste mot den positive siden av gel, mens positivt ladede proteiner bevege seg i motsatt retning.
Denne teknikken kan brukes til å skille proteiner som har samme molekylvekt, men ulike belastninger, eller når størrelsen er ikke viktig (for eksempel for å se på endringer i nærvær av ulike protein under utviklingen av en sykdom).,
To-dimensjonal elektroforese
Disse dager, må du lade (IEF) og størrelse (SDS-PAGE) separasjon er ofte brukt sammen i to-dimensjonal elektroforese, hvor kostnad separasjon er brukt for første gang, og da er disse separert proteiner er skilt ut på grunnlag størrelse.
Dette er en svært effektiv metode for å identifisere et bestemt protein fra et vev som kan inneholde tusenvis av proteiner og hvor det kan bare være små forskjeller mellom kontroll og behandlet prøver (f.eks. for å se etter et protein som er involvert i motstand mot insekter predasjon i planter).