gelelektroforese bruges til at adskille makromolekyler som DNA, RNA og proteiner. DNA-fragmenter adskilles efter deres størrelse. Proteiner kan adskilles efter deres størrelse og deres ladning (forskellige proteiner har forskellige ladninger).
hvordan adskilles DNA-fragmenter ved hjælp af gelelektroforese?
en opløsning af DNA-molekyler anbringes i en gel., Fordi hvert DNA-molekyle er negativt ladet, kan det trækkes gennem gelen af et elektrisk felt. Små DNA-molekyler bevæger sig hurtigere gennem gelen end større DNA-molekyler.
resultatet er en række ‘bånd’, hvor hvert bånd indeholder DNA-molekyler af en bestemt størrelse. Båndene længst fra starten af gelen indeholder de mindste fragmenter af DNA. Båndene tættest på starten af gelen indeholder de største DNA-fragmenter.,
Når du er gel-elektroforese, der bruges til at adskille DNA-fragmenter?
Gel elektroforese kan bruges til en række formål, for eksempel:
- til At få et DNA-fingeraftryk for retsmedicinske formål
- til At få et DNA-fingeraftryk for faderskab test
- til At få et DNA-fingeraftryk, så du kan se, for de evolutionære relationer mellem organismer
- til At kontrollere en PCR-reaktion.,
se videoklippet: brug af gelelektroforese til at kontrollere en PCR-reaktion - til at teste for gener forbundet med en bestemt sygdom.
Find ud af mere i artiklen, gelelektroforese kan bruges til at finde gener forbundet med en sygdom.
hvornår bruges gelelektroforese til at adskille proteiner?
takket være TV-Sho .s som CSI er mange mennesker bekendt med brugen af gelelektroforese til at adskille makromolekyler som DNA. Imidlertid kan gelelektroforese også bruges til at adskille proteiner.,
forskellige proteiner har forskellige størrelser, hovedsageligt på grund af antallet af aminosyrebyggesten i deres struktur. Kemiske modifikationer knyttet til proteinet påvirker også dets størrelse. Forskellige proteiner har også forskellige afgifter. Dette kan skyldes både de typer aminosyrer, der bruges til at konstruere dem, såvel som de typer modifikationer, der er knyttet til dem.
forskellige typer elektroforesegeler bruges til at tilvejebringe forskellige typer information. Den type gel, du vælger, afhænger derfor af den type spørgsmål, du stiller.,
Størrelse Adskillelse
Typisk, geléer, der er lavet af polyacrylamid bruges til at adskille proteiner på basis af deres forskellige størrelser. Normalt behandles proteinerne først med varme og et kemikalie kaldet SDS for at afsløre proteinet. SDS er et vaskemiddel, der giver alle proteinerne den samme samlede negative ladning, så når en elektrisk strøm påføres gelen, skyldes adskillelse kun proteinets størrelse. Denne teknik kaldes SDS-PAGE (SDS-polyacrylamid gel elektroforese).,
små proteinmolekyler bevæger sig hurtigere gennem gelen end større proteiner, hvilket resulterer i en række ‘bånd’. Hvert bånd indeholder et protein af en bestemt størrelse. Disse kan sammenlignes med standarder af kendte størrelser.
en SDS-side gel er blevet brugt til at adskille proteiner på basis af størrelse. Prøverne er blodet af forskellige hajarter. Den første bane indeholder markører af kendte størrelser. Store proteiner er øverst på gelen, og små proteiner er i bunden.,
denne teknik kan anvendes til mange formål, herunder rensning af et bestemt protein, for eksempel til isolering af et en .ym til fødevareindustrien.
ladnings-og pH-separation
isoelektrisk fokusering (IEF) og agarosegelelektroforese er to måder, hvorpå proteiner kan adskilles ved deres forskellige elektriske ladninger. I modsætning til SDS-PAGE holdes proteinerne normalt i deres oprindelige (foldede) tilstand. Den type gel, der bruges, og opløsningen omkring gelen, er også forskellige.
i agarosegelelektroforese lægges proteiner i midten af brønden., De med en stærk negativ ladning bevæger sig hurtigst mod den positive side af gelen, mens positivt ladede proteiner bevæger sig i den modsatte retning.
denne teknik kan bruges til at adskille proteiner, der har samme molekylvægt, men forskellige ladninger, eller når størrelse ikke er vigtig (f.eks. for at se på ændringer i tilstedeværelsen af forskellige proteiner under udviklingen af en sygdom).,
todimensionel elektroforese
i disse dage anvendes ladning (IEF) og størrelse (SDS-side) adskillelse ofte sammen i todimensionel elektroforese, hvor ladningsseparation først anvendes, og derefter adskilles disse adskilte proteiner på basis af størrelse.
Dette er en meget effektiv metode til at identificere en bestemt protein fra en væv, der kan indeholde tusinder af proteiner, og hvor der kan kun være små forskelle mellem kontrol og behandlede prøver (fx til at se for et protein, der er involveret i modstand mod insekt prædation i planter).